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Topoisomerase I来源于牛痘病毒（vacciniavirus），通过基因重组方案制备纯化。其能解旋DNA的超螺旋结构，除此外其能识别并切割双链DNA末端[5’C(T)CCTT↓]，并且与DNA形成共价连接形成稳定复合物。该共价复合物遇到DNA的5’-OH基团后，重新连接形成完整DNA链。因此，使用Topoisomerase I 酶可作为DNA的连接有效工具。其可用于DNA的载体连接、缺刻修复、接头连接等实验。
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