产品概述
细胞描述：
hk-2细胞属源于正常肾的近曲小管细胞，通过导入hpv-16 e6/e7基因而获得永生化。将含有hpv-16 e6/e7基因的重组的逆转录病毒载体plxsn 16 e6/e7转染外生包装细胞psi-2；psi-2细胞产生的病毒再去感染兼嗜性包装细胞系pa317，收关将pa317细胞产生的病毒颗粒导入正常的肾皮质近曲小管细胞。尽管plxsn 16 e6/e7中含有新霉素抗性，但未用g418筛选转导克隆。southern和fish分析显示，hk-2细胞来源于单克隆。pcr检测证实，hk-2细胞基因组中含有e6/e7基因。
细胞特性：
1）来源：人类，成人，肾，皮质/近端小管
2）形态：上皮细胞样，贴壁生长
3）规格：1×106cells
4）培养条件：mem 10?s 1f/s
空气，95；二氧化碳，5%。37℃
特殊说明：
1、该细胞贴壁较慢，为使细胞贴壁更容易，建议可提前在培养皿/培养瓶中铺0.25的明胶溶液，并于贴壁24~48小时后再进行后续操作。
2、该细胞生长不能过密，请在生长密度80时进行传代。
3、使用0.05胰酶消化细胞，由于defined k-sfm为无血清培养液无法终止胰酶消化，所以消化完成后要通过离心（建议125xg离心5到10分钟）去除胰酶或者用带10血清的培养基来终止消化，再进行后续操作。
细胞接收后的处理：
1）收到细胞后，活细胞首先观察培养瓶是否完好，培养液是否漏液，培养基是否浑浊；冻存细胞是否干冰已挥发完，冻存管盖是否脱落，破碎，若有这类情况，请务必拍照记录，并于收货24h内与我们联系。
2）细胞处理：
复苏的细胞：如果是t-25培养瓶活细胞，收到后请用75的酒精对培养瓶表面进行消毒处理，然后转入培养箱中静置2~3h后再进行后续处理。
备注：运输用的培养基不宜再次用来培养细胞，请按照说明书新配置完全培养基来培养细胞。  
冻存细胞：如果是干冰运输的冻存细胞，收到后请立即转入液氮存储或者短暂（24h）放置-80度冰箱保存，或者直接进行细胞复苏。
细胞复苏、传代及冻存流程参考：
1、细胞复苏
1）配制完全培养基：基础培养基 胎牛血清 双抗（特殊培养基特殊配置）；
2）细胞复苏：取5ml完全培养基于15ml离心管中，37℃水浴锅预热，从液氮管（或者-80度冰箱）中快速取出冻存的细胞，放入37℃水浴锅中，摇晃使快速化冻（1min左右），然后将化冻的细胞和预热的培养基，移入超净工作台中，化冻的细胞加入到含预热培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3）吸弃上清，得到细胞沉淀，用2ml完全培养基轻轻重悬细胞，加入到t25培养瓶中，做好标记，放入37℃，5co2饱和适度培养箱中培养（培养皿复苏效果更好）；
4）24h后，观察细胞贴壁情况（未贴壁的即为死细胞针对贴壁细胞），吸弃旧培养基，加入新鲜的预热（室温或37℃）的完全培养基，继续培养。
2、细胞传代
1）待细胞生长到80-90汇合度时，吸弃旧的培养基，加入1ml无菌pbs润洗一次，以去除残余的培养基及血清（血清含有胰酶的抑制因子），然后加入1ml 0.25胰酶，37℃培养箱中消化（1~2min左右，不同细胞消化时间不同），取出细胞，镜下观察细胞至细胞皱缩变圆；
2）加入1ml完全培养基（含fbs）终止消化，轻轻拍打，使细胞脱落下来成单个细胞悬液，收集细胞于15ml无菌离心管中，1000rpm，离心5min；
3）收集细胞沉淀，完全培养基重悬，一分为二（可根据细胞生长速度调整比例），分别加入到2个新的培养瓶中，做好标记，放入培养箱中培养。
3、细胞冻存
1）按照细胞传代方法，在超净工作台内消化收集细胞沉淀，取少量细胞用于计数；
2）用预冷的1ml冻存液（90完全培养基 10dmso）或者无血清细胞冻存液重悬细胞，加入到1.2ml冻存管中，密度为1*106个/ml。
3）放入程序冻存盒，-80℃过夜后，转入液氮长期保存。
